荧光定量PCR耗材的使用及注意事项

2020-01-07  来自: 广西博英创展科技有限公司 浏览次数:13


高通量的96孔PCR板和8联管是在聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中,主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物。医疗级聚丙烯(PP)材质因其极高的纯净度和稳定性,能适应PCR反应过程中反复高低温设定,并且能够实现高温高压灭菌操作,常常被用于PCR耗材的生产。
随着荧光定量PCR技术的普及,该技术被广泛用于遗传、生化、免疫、医药等领域,不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的研究领域。
 广西实验室荧光PCR
如何正确使用96孔PCR孔板?

  • PCR板有透明和乳白色可选,其中乳白色更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量PCR仪(如伯乐CFX系列,ABI 7500fast 以上型号, Roche 480系列),但如果荧光定量PCR仪是底部光源的,则应选择透明的。
  • PCR板根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边和全裙边三种设计模式,不同厂家的荧光定量PCR仪会设计不同的切角或边缘凸起,请选择适合该PCR仪的板子。
  • PCR板又分100ul体积(矮板)和200ul体积(高板),根据机型的不同选择,选择不同高度孔板,避免高度错误对机器造成破坏和加热不均导致数据失真。
  • 当使用96孔板做荧光定量PCR实验的时候,推荐使用光学膜代来密封反应孔。正确的封膜方法是:先沿着96孔板的纵向压膜,然后横向,最后沿着板的边缘按压使之密封。具体手法见下面图示:

 
 

  • 加样后会在管壁上飞溅一些小液滴,另外反应体系内也会有一些气泡,需要离心去掉挂壁液滴和气泡。请使用专用的微孔板离心机解决上述问题。

 
 

  • PCR板属于一次性消耗品,生产一次成型,不建议剪开使用容易造成实验误差增加,不能清洗或部分重复利用。不要为了节省一点小钱,而给实验带来后续分析上的困扰。

 
样本量少,用8联管做实验又该注意哪些呢?
 
 
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  • 8联管也分乳白和透明两种,选择方式和孔板一样,根据PCR仪的荧光信号采集方式决定。
  • 8联管同样也有0.1ml(矮管)和0.2ml(高管),根据PCR仪的加热模块体积确定。
  • 8联管的盖子一般有光学平盖和凸型圆盖之分,光学平盖适用于荧光定量PCR,圆盖适用于普通PCR。
  • 使用单管或8联管做实验,并且样本数量不多的时候,建议在样品加热块(TRAY)上对称地安放样品,纵向放置,并且优先放在第6列或第7列,然后逐渐向两边放置。这样做的好处是热盖压下来的时候不至于发生倾斜,各个反应管的受力和受热都比较均匀,提高孔与孔之间的数据精密性。也可以在加热模块四角的位置,放置4个单管平衡热盖压力,避免扩增少量样本时出现管子变形的情况。
  • 管盖没有盖好造成PCR反应液热蒸发,影响反应温度的准确控制及反应也各成份的浓度,同时也成为一个污染源。不但会因压盖时由于粗心或者用力不均致使部分盖子变形,而且还会造成样品的交叉污染,所以我们推荐用独立管盖的8联管,每管盖一体,确保样本独立反应,避免交叉污染。




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